RPA-CRISPR/Cas12a-systemet i den här studien uppnår snabb (30–40 min), ultra-känslig (1 kopia/μL) HCMV-detektion genom att rikta in sig på den tidigt-uttryckta UL123-genen, vilket överträffar konventionella metoder i klinisk provtestning. Denna innovation ger{9}låg{9}diagnos{1}. särskilt hos patienter med nedsatt immunförsvar, och understryker genomförbarheten av CRISPR-baserad diagnostik för att förbättra behandlingen av HCMV-relaterade sjukdomar. Analysens enkelhet och effektivitet framhäver dess potential som ett-vårdverktyg för-begränsade resurser.
Mönster för RPA-förstärkningsställen och urval av kit.
(A) RPA-primerdesign avseende placeringen av amplifieringsfragment. Pilar indikerar baspositionerna från början till slutet av det amplifierade fragmentet med P1-P6-primrarna.
(B) Agarosgelelektroforesbilden av RPA-produkten amplifierad med 6 HCMV-primeruppsättningar.
(C) Screening av amplifieringseffektiviteten hos RPA-kit från olika företag. P: Primer, NC: Negativ kontroll.
Resultaten visade att AmpFuture-kitet uppvisade den högsta amplifieringseffektiviteten.
Jämförelse av positiva frekvenser av MIRA-CRISPR/Cas12a, PCR - Fluorescent Probe Method och qPCR i kliniska prover.
Vi samlade in blod- och urinprover från 48 kliniska patienter. Genomiskt DNA extraherades från dessa prover med hjälp av TIANamp Genomic DNA Kit, och resultaten av UL122-detektion analyserades med PCR-fluorescerande sondmetoden. Genom att jämföra våra resultat med kliniska diagnoser identifierade våra metoder 6 positiva prover som var negativa i kliniska tester.
