Akuta andningsinfektioner är vanliga andningssjukdomar hos barn, ofta orsakade av virus. Respiratorisk syncytialvirus (RSV) och andningsadenovirus (ADV) är två vanliga patogener som orsakar akuta andningsinfektioner hos barn. Milda fall kan orsaka vanliga förkylningssymtom som hosta och rinnande näsa, medan allvarliga fall kan orsaka allvarliga komplikationer som lunginflammation och otitis media. Enligt rekommendationerna från Världshälsoorganisationen måste detekteringen av patogener vara snabb, korrekt, känslig och specifik och bör inte lita på specialiserade tekniker eller stora instrument. Därför är det särskilt viktigt att utveckla en detekteringsmetod för RSV och ADV som kan uppfylla ovanstående detekteringskrav.
Forskningsgruppen för direktör Ma Dongli från Institute of Pediatrics of Shenzhen Children's Hospital publicerade en artikel "A Multiplex Recombinase Polymerase Amplification Analys i kombination med CRISPR/ CAS12A för detektering av andningssyncytialvirus och respiratoriskt adenovirus" i tidskriften ", vetenskapliga rapporter", med en påverkan av 4.6.
Forskningsöversikt
Den multi-enzymet isotermiska snabba nukleinsyramplifieringsteknologi MIRA kombineras med CRISPR/CAS-detekteringssystemet. Genom att utforma MIRA -primrar och CRISPR RNA (CRRNA), utföra flera sekvensjämförelser, optimera reaktionsbetingelserna och använda fluorescens numeriska detekteringsenheter för att verifiera känslighet och specificitet.
Och med hjälp av QPCR -resultaten som jämförelsekontroll studerades konsistensen av testresultaten av 160 kliniska halsvattprover.
Experimentella resultat
1. Känslighet och specificitet för MIRA-CRISPR/CAS12A-detekteringsmetod
I detekteringen av MIRA-metoden används RSV-F1/R1-primerparet för att förstärka nukleinsyror från halsplabbprover av RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, Flub, HMPV, FluA eller RSV/ADV-saminfekterade patienter. Förutom RSV och ADV, som hade förstärkta band, var de andra resultaten negativa, vilket indikerade att de valda MIRA-primrarna inte korsreaktioner med de andra åtta patogenerna testade och var väl bevarade.
Därefter utspäddes RSV- och ADV -rekombinanta plasmiderna 10 gånger med sterilt vatten, och detektionsgränserna för RSV och ADV var båda 106Kopior/ml.
(1-10: halsplabbprover från patienter med RSV, RSV/adv co-infektion respektive andra andningspatogenprover))
2. Jämför med qpcr
Jämfört med QPCR -metoden är detektionsgränserna för RSV och ADV båda 103 kopior/ml
(Känslighet för qPCR -upptäckt av RSV och ADV)
MIRA-CRISPR-metoden är mer lämplig för gräsrotslaboratorier, med kort detektionstid, enkel drift och inget behov av storskaliga QPCR-instrument för att slutföra experimentella operationer.
3. Jämförelse av kliniska prover
Halvpinnprover samlades från 160 barn med akuta luftvägsinfektioner. Samtidigt användes MIRA-CRISPR-metoden och qPCR-metoden för detektion, och resultaten jämfördes med kliniska prövningsresultat.
Jämfört med QPCR-metoden var känsligheten för MIRA-CRISPR-metoden för RSV och ADV 98,1% respektive 91,4%, och detekteringsspecificiteten var 1 0 0%. Kappa -värdet är större än 0,95, vilket indikerar en hög grad av konsistens.
MIRA-CRISPR-metoden har fördelarna med snabb, känslig och specifik upptäckt av RSV och Adv. Det kan upptäcka virala infektioner snabbt och exakt och är mer lämpad för användning i områden med knappa medicinska resurser.