Här kan du skapa sCRAM (suboptimal protospacer adjacent motiv (PAM)-medierad CRISPR RNA och Cas12a nukleas kombinerat med multienzym isotermisk snabb amplifiering), en snabb och extraktionsfri-diagnostisk plattform som detekterar ASFV inom 20 minuter. sCRAM integrerar ett snabbt nukleinsyrafrisättningssteg (40 grader, 5 min) med en ett-rörsreaktion som kombinerar multienzym isotermisk amplifiering (MIRA) och en suboptimal PAM-förmedlad CRISPR/
Cas12a-system (37 grader, 15 min), möjliggör instrument-fri visuell avläsning via UV-ljus eller laterala flödesremsor (LFS). sCRAM demonstrerar singel-kopieringskänslighet och uppvisar ingen kors-reaktivitet med fem vanliga svinpatogener (PRRSV, PPV, JEV, PCV). Utvärderingen av 111 simulerade och kliniska prover (inklusive blod, plasma och pinnprover) visade en 100 % överensstämmelse med qPCR för UV-avläsning och 98,20 % för LFS
avläsning, där båda metoderna uppvisar 100 % specificitet. Enkelheten, hastigheten och fältanpassningsförmågan hos sCRAM understryker dess potential för decentraliserad ASFV-övervakning i resurs-begränsade inställningar, vilket erbjuder ett kraftfullt verktyg för att begränsa utbrott.
I den här studien utvecklade vi sCRAM, en snabb och fält-distribuerbar ASFV-detektionsplattform som integrerar suboptimal PAM-förmedlad CRISPR/Cas12a med multienzym isotermisk amplifiering. Analysen uppnår en-kopia 1 kopia/uL-känslighet inom 20 minuter och visar ingen korsreaktivitet- med stora svinpatogener. Klinisk validering av blod-, plasma- och pinnprover visade full överensstämmelse med qPCR med UV-ljusavläsning och 98,20 % noggrannhet via laterala flödesremsor. Med förenklad drift, hög känslighet och specificitet samt tolkning av visuella resultat erbjuder sCRAM en stor potential för-ASFV-övervakning på plats och bredare-tillämpningar för-vårddiagnostik.
